Начало » Диагностика » Лабораторна диагностика

RSS и карта на сайта

Разпространи съдържание
повече

Кой е онлайн

В момента има 5 гости онлайн.

Статистика

посетители след 30 март 2009

Тестове за вирусно натоварване при хепатит C

Версия за печат

Въведение 

На англиски тези тестове се записват като Viral Load изследвания. Друго наименование, което се използва е PCR тест, идващо от Polymerase Chain Reaction, но както ще се разбере по-долу, правилно е термина PCR тест да се използва само при определен тип тестове.
Правилното име, което трябва да се използва е Тестове за измерване на вирусното натоварване (Viral Load Tests). При тях се прави изследване на кръвта, като търси рибонуклеиновата киселина (RNA) на вируса на хепатит C. Наличието на рибонуклеинова киселина на вируса в кръвта е индикатор за това, че вируса се размножава активно и заразява нови клетки.
При изследването се измерва количеството на RNA в един милилитър кръв. Viral Load тестовете могат да потвърдят, че изследвания пациент има вирус в кръвта, който активно се размножава и с това да помогнат да се прецени по-ясно състоянието на пациента, както и да се вземе решение за подлагане на лечение. Мерната единица, която се използва като международен стандарт е International Units/ml (IU/ml).


Видове тестове за измерване на вирусното количество

Има две категории тестове:

Качествени тестове - тези тестове се опитват да открият наличието на рибонуклеинова киселина (RNA) на вируса в кръвта. Те се използват за да потвърдят наличието на хроничен хепатит C. Ако бъде открито наличието на вирусна RNA в кръвта, то теста е положителен. Ако не бъде открита вирусна RNA, то резултата е отрицателен.

Количествени тестове - тези тестове измерват количеството на вируса в един милилитър кръв. Резултатите от тези изследвания се използват и за да се предвиди как ще се отрази интерфероновото лечение на пациента. Колкото са е по-ниско измереното количество, толкова е по-голям шанса пациента да се излекува.

 
Отделно има друго разделение на тестовете:

Polymerase chain reaction (PCR) -или популярно използваното име PCR тестове. Начина, по който те измерват наличието на вируса беше споменат по-горе, търсят за наличие на вирусна рибонуклеинова киселина (RNA) в кръвта, т.е. търсят генетични следи от вируса. Важно е уточнението, че когато говорим за PCR изследване се има предвид качествено измерване на вирусното количество, а не количествено. Засега не откривам потвърждение, че има PCR тест, който е количествен, освен т.нар. RT-PCR, който обаче се използва само при пациенти, болни от СПИН.

Branched-chain DNA (bDNA) - bDNA метода, с който в плазма или серум, добит от кръвната проба на пациента се изследва вирусна RNA с помощта на т.нар. signal-amplification методология. Това, което аз знам е, че се взима вирусна RNA и се оставя да се размножава в този кръвен серум и съответно се следи как той се размножава и накрая се измерват броя вирусни копия в един милилитър. Затова и метода изисква време, през което лекарите казват че броят.

Transcription-mediated amplification (TMA) - Това отново е качествен тест, който също се опитва да засече наличието на вирусна RNA в кръвната проба. Този тест е по-нов, по-евтин, по-чувствителен, а също и по-надежден. Долната му граница на чувствителност е 5-10 IU/ml.

 
Измерителни единици и чувствителност на тестовете 
Общоприетия стандарт за измерване е IU = International Unit. Този стандарт е общоприет и вече почти масово навлязъл навсякъде. Тъй като има китове (kits) или образец (assay) за тестове, лабораториите в зависимост от това кой кит (образец) използват имат таблица с помощта на която обръщат изчислените копия на вируса към International Units. Така резултатите се стандартизират и могат лесно да бъдат тълкувани, независимо в коя лаборатория е правено изследването.
Ако пациента иска да обърне резултатите от изследванията с в копия  - copies/ml (или eq/ml), то тогава се препоръчва да умножи резултатите си по 3.
 
Каква е чувствителността на различните тестове.
* PCR тестовете имат чувствителност 50 IU/mL. Т.е. те не могат да потвърдят със 100% че изследвания пациент няма някакви минимални количества на вируса в кръвта.
* bDNA тестовете в зависимост от използвания кит имат различна долна и горна граница, мисля че при почти всички тя е почти еднаква. Тук ще цитирам горната и долната граница на един от използваните образци Bayer Versant™ HCV RNA 3.0 Assay (bDNA)
Долна граница: 615 IU/mL (3200 copies/mL, използва се множител 5.2)
Горна граница: 7 690 000 IU/mL (40 000 000 copies/mL, използва се множител 5.2)
* TMA тестовете имат чувствителност от 5-10 IU/mL
 
Интерпретиране на резултатите от тестовете
   1. По отношение на качествените изследвания, те дават или положителен или отрицателен резултат. Ако теста открие наличието на вирусна RNA в кръвта, то той дава положителен резултат, иначе резултата е отрицателен. Пак искам да спомена, че досега няма толкова чувствителен метод, който да каже със сигурност 100%, че в кръвта не се засича вирусна RNA. Най-чувствителните качествени тестове са TMA тестовете, които обаче слизат до 5 IU/mL долна граница. Т.е. ако те дадат отрицателен резултат, това значи че изследвания пациент има резултат по-малък от 5 IU/mL или пък наистина няма никакъв остатък от вируса в кръвта си. Качествените изследвания се използват, за да потвърдят наличието на вируса на хепатит C в кръвта при пациенти, които са дали положителен резултат при изследването за наличие на HCV антитела (anti-HCV).
Качествените изследвания се използват и за наблюдаване на пациенти преминали през лечение. Ако пациент преминал успешно през интерфероново лечение даде отрицателен резултат при качествения тест 6 месеца след като е завършил лечението, то се приема че той е дал т.нар. Задържан Вирусологичен Отговор, или Sustained Virological Response (SVR). Пациентите, постигнали SVR се приемат за излекувани като 98-99% от тях константно продължават да дават отрицателен резултат при качествените изследвания. В края съм публикувал линк към обявени резултати от дългогодишни изследвания върху пациенти постигнали SVR, което потвърждава, че 98-99% от тях задържат резултата и спират хроничната инфекция на черния дроб, причинена от вируса.
   2. Количествените изследвания се използват, за да се предвиди шанса на даден пациент да изчисти вируса при евентуално интерфероново лечение. Тези изследвания се използват и по време на провеждано лечение на пациенти, като критерии за успешно протичащо лечение е т.нар. логаритмично падане на количеството на вируса. Единично логаритмично намаляване е падане на нивата 10 пъти. Т.е. ако пациента е имал 1 000 000 IU/mL преди лечението, то на третия месец след началото му се очаква той да има намалели стойности с поне 10 пъти, т.е. 100 000 IU/mL. Ако пациента не постигне такова намаление на количеството, то тогава е много вероятно лечението му да бъде прекратено, заради малките шансове то да завърши успешно.
Как се определя кои резултати са ниски и кои високи и какви са шансовете за излекуване според тези резултати.
Според информация публикувана наскоро, за определяща граница която определя количеството като ниско или високо се определя 400 000 IU/mL.
Постигнатия SVR от представените резултати от френски лекари пред 42-та годишна конференция на Европейската Асоциация по чернодробни болести:
                                             ≤ 400,000     > 400 000:
        всички пациенти:                   73%              43%
        пациенти с генотип 1:           63%              37%
        пациенти с генотип 2/3:        86%              63%
 
Затова може да се приеме, че правилното разделение е:
Ниски нива: ≤ 400 000 IU/mL
Високи нива: > 400 000 IU/mL
Тези нива са определящи за пациенти, които досега не  са били подлагани на лечение. При пациенти, които вече са преминали през неуспешно лечение границата от 400 000 IU/mL не е толкова определяща за предвиждане на изхода от лечението.
Смята се, че колкото по-ниски нива има даден пациент, толкова е по-голям шанса той да се излекува. Искам да уточня, че върху шанса за излекуване влияят още много други фактори, като възраст, пол и т.н. но за момента няма начин как да се прогнозира със сигурност от 100% как даден пациент ще реагира на интерфероновото лечение. Затова всеки, независимо от показателите, които има е длъжен да опита да се подложи на лечение. 
 
Друга класификация на нивата, която може да се използва за ориентир е (при превръщането в IU/mL ще ползвам множител 3):
*       Много ниски: < 200 000 eq/mL (< 66 000 IU/mL)
*       Ниски: 200 000 - 1 000 000 eq/mL (66 000 - 333 000 IU/mL)
*       Средни:1 000 000 - 5 000 000 eq/mL (333 000 - 1 600 000 IU/mL)
*       Високи:5 000 000 - 25 000 000 eq/mL (1 600 000 -  8 330 000 IU/mL)
*       Много високи:> 25 000 000 eq/mL (> 8 330 000 IU/mL) 
 
Рекорда от най-висока измерена стойност на пациент, за който съм чел е 45 000 000 (45 млн.) IU/mL.
 
Важно е да се знае и, че количеството на вируса в кръвта няма директна връзка със степента на увреждане на черния дроб и прогресирането на болестта. Т.е. ако даден пациент има високи нова на вируса в кръвта това не значи задължително, че той има сериозно увреждане, както и при хора с ниски нива не значи че техния черен дроб има минимални увреждания.
 
Лаборатории в България, провеждащи Viral Load тестове  
Детската болница, в близост до Военна Академия. Телефон за контакти: 952 38 40 вътр. 273. Вътрешния номер е на вирусологичното отделение, д-р Цветанска е завеждаща отделението. Цената на качествения PCR там е 100 лева, а на количествения е 200 лева.
*  Многопрофилна болница за активно лечение "Св. Иван Рилски", в лабораторията на доц. Антонов. Телефонът за връзка е: 952 29 72. За момента има възможност да се правят платени PCR изследвания. Цената на качествения PCR е 200 лева. Цената на количествения PCR също е 200 лева.
 
*  Национален център по заразни и паразитни болести /НЦЗПБ/, в сграда "Вирусология". Адресът е бул. "Ген. Столетов" 44 А, в близост до Централния Софийски затвор.  Лабораторията за момента прави само качествен PCR, цената е 150 лева. Телефони за контакти - 931 23 22 (24), 931 07 13, 822 01 50.  Завеждащ лабораторията е ст.н.с. II ст.д-р Павел Теохаров.
 
*  Медико-диагностична лаборатория "Писанец",гр. Пловдив. Правят количествен PCR, използваният метод е TagMan Real Time PCR. Цената на изследването е 180 лева.
 
*  Медико-диагностична лаборатория "Кандиларов", гр. София. Правят количествен PCR, цената е 250 лева.
 
 
*  Лаборатория "Цибалаб".Правят качествен PCR, цената е 91.70 лева.
 
*  Лаборатория "Кандилaров". Правят количествен PCR, цената е 250 лева.
 
*  Германско-българска самостоятелна медико-диагностична лаборатория Зинвест-К. В Пловдив се намира срещу поликлиниката на ВМИ на "Васил Априлов" (ул. "Царево" 1, телефон: 032/622 056).
Има клонове в Стара Загора (ул. "Руски" 56, телефон: 042/648 199) и Велико Търново (ул."Никола Габровски" 47). В лабораторията се прави количествен PCR на цена 200 лева и качествен PCR на цена 110 лева.
Източници
  1. Fact Sheet - HCV Viral Load Tests (Dec 2007)
  2. Viral Loads
  3. 400,000 IU/mL Is the Optimal Baseline Viral Load Cut-off to Predict Response In Treatment-naive Patients with Genotype 1 HCV
  4. Cure for hepatitis C
  5. Signal Amplification - Definition
  6. The Liver
  7. Bayer Versant™ HCV RNA 3.0 Assay (bDNA)
  8. Bayer Versant™ HCV RNA 3.0 Assay - Part 2 - Summary of Safety and Effectiveness
  9. PCR (Polymerase Chain Reaction)
  1. Hepatitis C Virus RNA Quantitative bDNA

Коментирай статията тук: http://hepatitis-bg.com/forum/index.php?topic=111.0

Статии и новини, свързани с   хепатит   хепатит А   хепатит B   хепатит C